儀器應(yīng)用

全自動凱氏定氮儀在大豆及飼料原料蛋白質(zhì)檢測中的應(yīng)用

作者：投稿用戶　編輯：霍爾德儀器　更新時間：2026-07-17

蛋白質(zhì)是人體必需的營養(yǎng)成分，大豆作為重要的植物蛋白來源，其蛋白質(zhì)含量是衡量大豆品質(zhì)的核心指標之一。我國相關(guān)標準對不同用途的大豆（如食品加工、飼料用）均有明確的蛋白質(zhì)含量要求，準確測定大豆中的蛋白質(zhì)含量對育種、收購、加工及質(zhì)量控制具有重要意義。

本方案依據(jù)《GB 5009.5-2025 食品安全國家標準食品中蛋白質(zhì)的測定》中第一法凱氏定氮法的全自動凱氏定氮儀法（5.2節(jié)），采用全自動凱氏定氮儀配合石墨消解儀進行測定。該方法將消解與檢測流程無縫銜接：樣品在石墨消解儀中消化完全后，消化管直接轉(zhuǎn)移至凱氏定氮儀，由儀器自動完成蒸餾、滴定及結(jié)果計算，具有自動化程度高、結(jié)果準確、重復(fù)性好的特點，適用于大豆及其他高蛋白食品中蛋白質(zhì)的批量檢測。

一、儀器與試劑

1.儀器

全自動凱氏定氮儀（配有滴定系統(tǒng)、蒸餾系統(tǒng)，可直接對消化管進行蒸餾滴定）；

石墨消解儀（控溫精度±1℃，最高溫度≥420℃）；

分析天平（感量0.001 g）；

消化管（與消解儀和定氮儀配套）；

移液管、量筒等玻璃器皿；

粉碎機（用于樣品粉碎）。

全自動凱氏定氮儀

圖1 全自動凱氏定氮儀及石墨消解儀外觀圖

2.試劑

硫酸銅（CuSO?·5H?O），硫酸鉀（K?SO?），硫酸（H?SO?，98%），氫氧化鈉（NaOH），硼酸（H?BO?），硫酸標準滴定溶液 [c(1/2H2SO4)=0.1mol/L]，甲基紅指示劑（1 g/L乙醇溶液），溴甲酚綠指示劑（1 g/L乙醇溶液），混合指示劑B：1份甲基紅乙醇溶液與5份溴甲酚綠乙醇溶液混勻，水：符合GB/T 6682規(guī)定的三級水。

試劑選擇說明：大豆蛋白質(zhì)含量較高（約35%~40%），建議使用 0.1 mol/L 硫酸標準滴定溶液進行滴定。當?shù)鞍踪|(zhì)含量≤1 g/100g時可選用0.05 mol/L溶液。

二、實驗方法

1.試樣制備

取具有代表性的大豆樣品，用粉碎機粉碎，使其完全通過0.9 mm（20目）孔徑的篩子，充分混勻后裝入密閉容器中備用。

2.試樣稱量與消解

準確稱取粉碎后的大豆試樣約 0.2 g（精確至0.001 g），置于干燥的消化管中。依次加入：硫酸銅 0.4 g，硫酸鉀 6 g，硫酸 15 mL。

輕輕搖勻，將消化管置于石墨消解儀上。啟動消解程序， 420℃恒溫消解至少1h，直至消解液呈藍綠色透明狀，確保消解完全。

消解結(jié)束后，取下消化管冷卻至室溫。無需轉(zhuǎn)移消解液，消化管可直接用于后續(xù)蒸餾滴定。同時進行空白試驗（不加樣品，其余步驟相同）。

大豆及飼料原料蛋白質(zhì)檢測

圖2 石墨消解儀消解過程圖

3.蒸餾與滴定

開機預(yù)熱全自動凱氏定氮儀，檢查堿液（氫氧化鈉溶液）、吸收液（硼酸溶液+混合指示劑B）、滴定液（硫酸標準滴定溶液）是否充足。

將含有消解液的消化管（包括試樣和空白）依次放入定氮儀的樣品盤上。

根據(jù)儀器操作說明，設(shè)置蒸餾滴定參數(shù)（如加堿量、蒸餾時間、接收液體積等）。儀器將自動加入氫氧化鈉溶液堿化蒸餾（加堿量根據(jù)消解用酸量設(shè)定，通常為酸體積的4倍）進行堿化蒸餾，釋放的氨被硼酸吸收，然后用硫酸標準滴定溶液自動滴定至終點（混合指示劑B由藍綠色變?yōu)闇\灰紅色）。

儀器自動記錄滴定體積并計算蛋白質(zhì)含量。分別記錄試樣消耗體積 V1和空白消耗體積 V0。